检测设备操作的“345”原则
在微生物实验室，需要达到一定程度的无菌，避免微生物污染。如果微生物实验是在不干净的实验室或样品被打翻的地方进行的，引入新的微生物污染样品的可能性很大。
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微生物学实验可分为两部分：前期准备和样品检验。
其实保持整个实验室的干净是很重要的，这样在绝育之前就不用太担心了。但是，灭菌后，您必须确保样品或培养基不受污染。其实绝育可以认为是一个“门”。培养基或一些设备如秸秆中的微生物在灭菌过程中被杀死，没有微生物干扰实验。要保证无菌环境(门后部分)的清洁，防止无菌培养基和设备被污染。
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无菌的重要性
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1.灭菌技术——高压灭菌
要点
描述
原理
压力下产生的湿热蒸汽杀死微生物的营养体和孢子。
密封
灭菌锅必须密封，以阻挡外界空气，从而避免空气对压力的影响，降低灭菌锅内的温度。
杀菌压力
在灭菌锅内，通过压力达到合适的灭菌温度，对灭菌没有影响，反而使蒸汽温度上升。对于标准操作，灭菌可以在121以15磅/英寸2的速度进行，所有空气都被赶走。
杀菌时间
当它达到一定的温度和压力时，需要保持一定的时间才能达到效果。为了杀死微生物，必须在121保持至少15分钟。
培养基灭菌
大多数情况下，实验室应在制备培养基后进行灭菌，灭菌应根据供应商的指导在适当的温度和时间进行;有些介质不适合灭菌。
器具消毒
器具消毒时，要考虑使用量。比如每天用10根吸管。灭菌时，一般可以用10根吸管作为包装，这样可以减少使用过程中器皿被微生物污染的可能性。
消毒带
在灭菌过程中，灭菌带可用于监控效果。杀菌条在杀菌前着色，杀菌后变黑。
再次绝育
如果初次灭菌无效，可以再次进行灭菌过程，但培养基不能进行第二次灭菌，应丢弃。
商店
灭菌后，培养基和器皿应妥善保存。一般来说，培养基应储存在远离光线的清洁空间，并应参考供应商的说明。
2.无菌技术——过滤
要点
描述
简历
物理分离法，利用高效过滤从液体培养基中分离微生物。
由于不需要加热和冷却，过滤比高温湿热灭菌节省时间。
过滤头
0.2微米的过滤头可以分离所有的细菌营养物质，并安装在注射器的末端。3.注意无菌过程
要点
描述
总结
一旦培养基或容器被灭菌，这种灭菌状态应保持到实验结束。
区域
培养基制备区(门外)和实验区(门内)之间最好设置缓冲室。
工作台顶部
工作前必须消毒，可以用70%酒精，也可以用含氯消毒剂。
消毒时间
无论用什么消毒剂，都要提供足够的消毒时间来杀灭微生物，一般5-10分钟，表面可以用纸巾擦干。
清洁桌子
光源必须有两种：一般照明和杀菌紫外线。紫外线灯是用来防止台面被微生物污染的，使用前还需要用消毒剂清洗。
出院
应该有一个好习惯，把东西放在工作台上，把动作保持在最小，避免污染。
镊子
如果用膜过滤的话，需要准备一个小烧杯，里面放少量酒精，不用的时候把镊子放在杯子里。
营养培养基
使用培养基前，应有相关日期，如配置日期或实验室接收日期(直接使用的培养基)。如果没有要求的日期，则不能使用该介质。
白大褂
穿干净的实验服，袖子要卷到肘部，避免接触培养基或样品造成污染。做实验前先洗手。
4.实验中无菌技术的注意事项
样本
个人的
酒精灯
样本应在无菌条件下采集。
使用无菌取样袋或瓶，
取样人员在取样前应戴上防护手套，并烧伤取样口。
样品容器应封闭并安全储存。
如果培养基或样品溅到实验服上，应在实验结束后换成干净的。
咳嗽或鼻塞可能带来微生物，影响实验。戴上防护手套和口罩。
实验前使用本森灯或酒精灯并点燃。
火焰在实验区形成一层保护层，可以防止空气中悬浮的微生物落到台面或培养基上。
打开瓶子
瓶颈
培养皿
打开瓶子之前，用纸巾清洁瓶盖和附近区域，以清除瓶盖上可能残留的微生物。
开盖后玻璃瓶口要消毒，瓶口和螺纹可以在酒精灯上方旋转，一般2-3秒。
打开培养皿时，盖子不能完全取下，而应保持在培养皿的上侧，以便倒入培养基或样品，这样可以减少空气粉尘或微生物的污染。
倒出培养基或样品后，瓶口再次过热，盖上盖子，用消毒剂清洗。
滤过膜
镊子
打开胶片包，千万不要碰胶片!
用镊子将薄膜从包装中取出，放在过滤头上。过滤漏斗不能完全取出，只需取出一点点放入滤膜即可。
过滤后，用镊子将滤膜转移到培养皿中，放在中间。用镊子转移滤膜
如遇过度着火，握住镊子的尾部，放在火焰上，保持着火。如果时间太长，碳会沉积在尖端。
握镊子时，尾巴朝上，直到烧光。
实验结束
扫
浪费
实验结束后，将培养皿放入培养箱中;剩余的培养基可以放回储存区，盖子必须关紧。
丢弃废物，如样品袋;可重复使用的物品应远离工作区域，以便回收、清洁和消毒。
用含有消毒剂的纸巾清洁台面。
实验过程中接触微生物的物品应被视为危险废物
这些废物可能含有微生物并导致疾病;如果含有致病菌，可能引发公共卫生事件。
废物最好能用湿热灭菌
从微生物实验室布局来看
一个设计良好的实验室可以提供一个合格的环境来支持安全有效的实验。首先，我们需要为实验室选择一个合适的物理位置：
远离生产或储运等其他作业区域;
没有从其他区域直接进入实验室;
实验室必须专用于微生物实验;
微生物检验应有专门的无菌室，与缓冲室和准备室分开。
通风和气流
安全
工作区
微生物实验室应有单独的通风系统，与其他操作区域的空气供应分开;
空调系统的废气必须直接从实验室排出，空调系统应定期清洗，并注意空气过滤器的清洁度。
实验室要限制，可以用卡或者其他方式控制。只有被允许进入实验室的人才能进入。
实验室人员应有足够的工作区域。按照GLP的标准，每人应该有20平方米的面积。足够的工作区域可以避免工作人员的碰撞和交叉污染。
易于清洁
照亮
反馈
实验室的墙壁、屋顶和门应光滑、清洁、易于清洁和消毒;
墙的接缝包括强者与墙之间，强者与地面应呈弧形;
灰尘不应收集在任何地方，如窗台或窗帘;
为了便于清洁，橱柜应该是可拆卸的或无接触的。
实验室应有足够的照明，包括不间断电源或备用发电机。
反馈
遵守GLP相关的安全规则
1.GLP必需品-工作区
要点
描述
总体布局
仪器、试剂和培养基的所有准备工作都应在实验前进行，以便合理利用时间，获得稳定的实验结果。
桌面布局
过量的培养皿、烧瓶或滤纸可能会干扰实验，并带来潜在的溢出、破损或交叉污染。
实验前消毒
在准备培养基或开始实验之前，工作台应进行清洁和消毒。可以使用70%酒精溶液、含氯水溶液或其他消毒剂。清洁后，等待几分钟，留出足够的时间杀死微生物。测试后消毒
实验结束后，彻底清洁工作区域，仍使用70%酒精溶液或其他消毒剂，保持一段时间，然后晾干。
危险废物的处置
必须对微生物的有毒废物进行有效管理，任何与微生物培养或培养基有关的物品都应视为有害物质;因为它们可能含有致病菌，所以需要小心处理。
废物灭菌
湿热灭菌是处理污染物和有害物质最简单有效的方法。用过的培养皿应放在灭菌袋中。灭菌后可作为一般废弃物处理。
可重复使用容器的消毒
当小物品(如移液器)需要灭菌时，可以根据实际消耗分组包装。湿热灭菌后，装袋，冷却保存。
避免浪费
合理安排很重要;实验室工作需要精确，但有时我们也需要快速工作，因为花费大量时间会延长设备、培养基或样品对环境的暴露时间。通过将必要的物品放在手边可以使用的地方，可以节省时间并提高工作效率。
2.GLP精华-清洁工作台
简介
使用
监控和控制
清洁工作台可以控制来自环境的污染，并在工作区域提供清洁的空气。清洁的空气吹向工作区域，同时可以防止外部空气进入工作区域
使用时，紫外线(或紫外线灯)应关闭，但使用后应打开。紫外线灯不亮，工作台不能使用;工作台必须清洁，电源和紫外线灯必须打开30分钟。
清洁工作台需要日常确认，通常由第三方公司进行
有效的实验室
应该是安全的实验室。如果忽视安全，每天使用的很多媒体或设备都会造成危害。降低这些危害带来的风险，不仅保护了工作场所，更重要的是保护了自己免受危险。
通过运用常识和遵循GLP相关的安全规则，我们可以最大限度地减少微生物相关行为造成的潜在危害。
安全用品
移动
安全产品包括口罩、手套和护眼。
口罩防止培养基和样品被污染，污染可能来自咳嗽或鼻涕;根据当地的要求和习惯，每个实验室都会有不同的要求。
戴手套，防止培养基或其他刺激性物质接触皮肤;从湿热灭菌锅中取出容器或器皿时，必须戴耐热手套。
在培养基的配制和实验中戴防护眼镜是一个好习惯，最好买带屈光度的防护眼镜。
移动培养基或样品时，应注意避免溅出或溅出;突然移动会造成安全隐患或导致无效实验;
不要使用夸张的动作或行为
同时，不要把任何东西放进嘴里，比如吸管。
火焰
湿热灭菌锅
实验中需要使用酒精灯或其他明火，但使用不当会带来较高的安全风险;
不使用时确保酒精灯完全关闭，有阀门时要经常检查垫片有无破裂或泄漏;
操作酒精灯时，确保火焰不接触衣服或皮肤。笔记本等易燃物品应远离火焰，以免意外点燃;
同时，注意易燃液体的容器。每次使用后盖上盖子，远离酒精灯的火焰;
使用火焰杀菌时，可以使用镊子。将镊子放入含有95%酒精的烧杯中。使用时，将镊子在火焰上燃烧1-2秒，取下镊子，等待火焰熄灭;
拿镊子时，尖端要朝下，这样热的酒精就不会流到手上。
湿热灭菌锅使用高压产生的蒸汽，温度可达1210C，杀灭微生物，也可给人体组织带来灼伤，必须特别小心操作;
这样的高温和蒸汽会带来很大的潜在危害，甚至残留的蒸汽也会带来很大的危险。打开灭菌锅时要非常小心，站在旁边，避免面对热量和蒸汽，慢慢开门，戴上防热手套。
将待灭菌的培养基和器皿均匀地放在托盘上，将大件物品放在侧面，确保物品不会相互碰撞。这样可以均匀地分散热量，平衡整个托盘
清洁桌子
样本操作
在干净的桌子上工作时，紫外线灯必须关闭。紫外线是危险的;
不要将手或手指放在紫外线灯下，以免灼伤皮肤;
不要直接看紫外线，以免损伤眼睛。
培养基和样品：用火焰灼烧瓶口时，停留4-5秒，旋转使整个表面都可以被灼烧，不要停留太久，不要使样品或培养基溢出;
如果样品是瓶装的，不要直接燃烧，以免爆裂。取2个烧杯，倒入70%酒精，将瓶子倒置放入烧杯中，使盖子和瓶颈的2.5厘米处可以浸入酒精中，取出瓶子，用干净的布擦干;同理，放入第二个烧杯中，取出瓶子，直立，直至酒精自然蒸发;
打开瓶子时，应特别注意不要污染样品。可以用消毒纸巾开瓶;用浸有95%酒精的开瓶器打开压盖瓶，燃烧;
开瓶后，用同样的方法烧瓶口，保证消毒用的酒精完全挥发;
你可以用同样的方法拉罐子，或者用含70%酒精的棉球擦拭罐子顶部。如果罐头必须使用开罐器，这个开罐器的操作与开瓶器相同;无菌包装的产品用含70%酒精的棉球擦拭。
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微生物防护设备
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1.初级保护(设备)
移液辅助设备，如移液器
生物安全柜
一次性塑料接种环和电加热接种环
螺旋盖试管和瓶子
高压釜
一次性塑料移液管
2.二级保护(人员)
工作服和防护服
手套(乳胶手套等)。)
安全眼镜、口罩或其他防护设备
